鸡马立克氏病琼脂扩散试验方法简介

可根据病的特征性的麻痹症状,全身进行性消瘦以及病变进行综合诊断。但要注意,内脏型病鸡的临床症状往往不甚明显,要确诊还须采取病鸡的周围神经做组织学检查。有条件时,也可应用琼脂扩散试验、荧光抗体检查和间接红细胞凝集试验等血清学方法诊断。
琼脂扩散反应的方法比较简单,是用马立克氏病高免血清来测定病鸡的羽囊有无病毒存在,借以确诊。可在病鸡腋下拔取1根羽毛,剪下毛根尖一小段,放在琼脂扩散板的外周检验孔内,每只鸡的1根羽毛占用1个孔;再将一定量的马立克氏病高免血清放入扩散板中央孔内,在室温中放置2~3天。最后观察反应结果,放羽毛的孔和血清的中央孔之间,如出现1条白色不透明的细线条即为阳性反应。血清学试验只能确定是否感染,不能确定是否发生肿瘤。有人主张,病鸡出现下列一种或多种征象,即可作为马立克氏病的诊断
①周围神经或脊神经节发生白血病性增大; ②眼球的虹膜褪色,瞳孔不整齐;
③在18周龄以内的鸡,各种器官中出现淋巴性肿瘤。 鸡马立克氏病防制
第一,对鸡群,特别是种鸡场,必须严格彻底地做好检疫工作,发现病鸡,立即隔离淘汰,彻底消灭本病的传染源。
第二,雏鸡对马立克氏病的易感性最高,必须与成年鸡分开饲养管理,防止接触。
第三,严格进行鸡群的消毒、卫生防疫,定期进行药物驱虫,特别要加强对雏鸡球虫病的防治。
第四,有条件的种鸡场应该注意选育对马立克氏病有抵抗力的品系。
第五,坚持自繁自养,在必需引进良种时,应到健康种鸡场购进种蛋。
第六,及时免疫接种,提高特异性抵抗力。

鸡马立克氏病是由马立克病疱疹病毒引起的一种传染病,以淋巴细胞增生和肿瘤形成为特征,引起肢麻痹,以及性腺、虹膜、各种脏器、肌肉和皮肤肿瘤病灶。在鸡的疾病中,马立克氏病是危害最大的疾病之一,鸡群受到感染后,陆续患病,引起大批死亡,常常给养鸡业带来巨大的经济损失。应用琼脂扩散反应检查血清抗体,成为马立克氏病特异性诊断及流行病学调查的一种重要血清学方法。国内外用琼脂扩散试验检疫马立克氏病,实际应用表明该法简便易行,基层兽医单位、鸡场及养鸡专业户均可采用,是一种较为理想的诊断检疫马立克氏病的血清学方法。大家一起来了解一下:

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1、试验材料

试验用品:塑料采血管、三棱针、打孔器、滴管、平皿、玻璃棒、烧杯、镊子、剪子、酒精灯和带盖瓷盘、琼脂及含8%氯化钠、pH
7.2~7.4的磷酸盐缓冲液等。

鸡马立克氏病羽囊抗原的制备:将病鸡皮肤呈现红肿感染处的羽毛从贴近皮肤处剪掉,剪下带有羽囊的皮肤,称重,加入二倍量的pH
7.2的磷酸缓冲盐水研磨。-20℃冰结后,再经37℃融化,反复冰融4次。25000
r/min离心15
min,上清液加入0.01%硫柳汞防腐。置低温保存备用,马立克氏病羽囊抗原也可向生物药厂购买。

鸡马立克氏病阳性血清的制备:用已知标准马立克氏病羽囊抗原或通过剖检和组织检查确诊为马立克氏病病鸡群,自病鸡拔下新羽毛若干、剪下羽囊,约5
mm长为抗原。由病鸡群挑选慢性病鸡或康复鸡采取血清。与羽囊抗原作琼脂扩散试验,如出现清晰沉淀线,则为马立克氏病阳性血清,采血分离血清,加0.01%硫柳汞防腐、冰结或4℃保存备用。马立克氏病阳性血清也可向生物药厂购买。

新葡亰平台游戏网址,2、操作

琼脂板的制备。用含有8%氯化钠的磷酸缓冲液配制的1%的琼脂溶液加热溶化后倒入平皿中,制成2~3
mm厚的琼脂板,平置室温凝固。

打孔。用打孔器(直径2~3
mm金属小管)按座标纸上面好的七孔图案,照图案固定位置打7个孔,中央打1个孔,孔径为3
mm,外围打6个孔,孔径为2 mm,孔与孔的距离为3~4
mm,如直接以羽囊作试验,则无须打抗原孔。

抗原及血清的添加。用标准抗原检测未知抗体:①用带胶乳头滴管将受检血清顺序逐个滴加于外周2、3、5、6孔内,加入阳性血清于1、4孔内,每加1份受检血清前,必须把吸管充分洗净拭干。②在外围孔滴加受检血清完毕后,用另一滴管向中央孔滴加标准抗原,抗原和血清的加入量以加满不溢出为度。③加样完毕平板加盖,在室温静止片刻,待加样稍吸附下沉后平放在铺有数层湿纱布的带盏瓷盘中,置37℃条件下,进行反应,逐日观察3天,并记录结果。测定抗体效价时,可倍比稀释血清,以出现沉淀带的血清最大稀释度为抗体效价。

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